作者：李璐; 刘万兵; 周亚洲; 纪宇欣; 周冬生; ...乳酸乳球菌拟菌颗粒疫苗鼠疫耶尔森菌f1抗原大肠杆菌htra突变株
摘要：目的基于乳酸乳球菌和鼠疫耶尔森菌F1抗原,制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。方法基于λ-Red一步重组技术,构建BL-21大肠杆菌htr A基因缺失突变株;将鼠疫菌F1抗原基因和PA基因克隆至p ET-28a(+)质粒中构建F1-PA融合蛋白表达载体,将此载体分别导入到BL-21大肠杆菌野生株和其htr A基因缺失突变株中构建F1-PA融合蛋白表达菌株;SDS-PAGE电泳分析F1-PA融合蛋白表达;镍柱亲和层析纯化包涵体蛋白,梯度稀释透析法复性F1-PA融合蛋白;乳酸乳球菌经热酸处理制备拟菌颗粒;革兰染色和透射电镜分析拟菌颗粒的形态;拟菌颗粒分别与F1-PA融合蛋白或F1蛋白共孵育制备拟菌颗粒疫苗。结果 F1-PA融合蛋白在大肠杆菌野生株和htr A缺失突变株中均以包涵体形式表达。拟菌颗粒对F1-Pa融合蛋白的吸附能力明显高于对F1蛋白的吸附能力。F1-PA融合蛋白在大肠杆菌htr A突变株中的表达量明显高于在野生株中的表达量。结论大肠杆菌htr A突变株用于表达F1-PA融合蛋白优于野生株。借助于肽聚糖锚钩蛋白,可将鼠疫菌F1抗原结合到乳酸乳球菌拟菌颗粒上制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。
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