作者：李凤; 耿晋; 张艳红; 魏从文; 何湘; 钟辉线粒体抗病毒信号蛋白基因敲除乳腺肿瘤嘌呤霉素
摘要：目的运用成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/Cas9基因编辑技术,构建线粒体抗病毒信号蛋白（MAVS）基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,研究MAVS对细胞生长的影响。方法针对MAVS基因第一外显子设计小向导RNA（sgRNA）,构建p X459-sgRNA重组质粒。然后利用嘌呤霉素筛选ZR-751 MAVS基因敲除的阳性克隆,Western印迹检测MAVS基因敲除情况,提取克隆基因组进行测序鉴定。平板克隆实验检测MAVS被敲除后对细胞增殖的影响,再利用MTS实验检测在DFX培养基刺激下,MAVS对细胞死亡的影响。结果 Western印迹结果说明ZR-751细胞株内MAVS已完全敲除;且在凋亡诱导剂DFX刺激下,MAVS被敲除后促进细胞增殖。结论利用CRISPR/Cas9系统成功构建了MAVS基因敲除的ZR-751乳腺癌细胞株,初步实验提示MAVS抑制乳腺癌细胞生长,为后续研究MAVS在肿瘤中的功能奠定了基础。
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