作者：顾晶; 李平; 张部昌; 刘萱; 曹诚中间丝细胞角蛋白细胞骨架氧化应激细胞凋亡
摘要：目的研究氧化应激条件下中间纤维蛋白细胞角蛋白（cytokeratin）的抗凋亡作用。方法利用RNA干扰（RNAi）技术敲低细胞内细胞角蛋白18（CK18）的表达，免疫印迹法检测细胞角蛋白的表达水平，并通过A549细胞建立细胞角蛋白敲低稳定细胞系。利用免疫荧光染色技术观察细胞角蛋白对细胞骨架的影响。利用流式细胞技术检测细胞角蛋白对细胞内ROS（reactive oxygen species）水平及氧化应激诱导细胞凋亡的影响。结果筛选获得3个干扰效果较好的RNAi序列，成功利用A549细胞建立细胞角蛋白敲低的稳定细胞系（A549-KD）。CK18表达敲低导致细胞内多种细胞角蛋白表达广泛下调，并破坏细胞微丝及微管骨架结构。氧化应激条件下A549-KD细胞抗凋亡活性显著降低。结论细胞角蛋白参与维持细胞骨架结构，对抗ROS诱导的细胞凋亡，提示其在细胞的氧化应激过程中发挥保护作用。
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