作者:王茹; 林周; 魏化伟; 彭辉; 侯春梅; 冯健...b细胞激活因子受体三聚体相互作用细胞增殖表达纯化
摘要:目的获得人类B细胞激活因子(Bcell activating factor,BAFF)胞外段融合蛋白并对其生物活性进行分析。方法构建pET32a/BAFF的原核表达载体,进行原核表达、亲和纯化,并通过SDS-PAGE、Western印迹进行鉴定。利用非还原电泳后的Western印迹与HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式。ELISA、OctetRED系统检测rhBAFF结合受体TACI的能力并做出实时动力学分析。M佟法检测rhBAFF促进B细胞增殖的活性。结果融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达,经Ni—NTA纯化获得的目的蛋白纯度超过90%;SDS-PAGE、Western印迹显示在相对分子质量为36×10^3位置有目的蛋白的特异条带;非还原电泳及HPLC分析表明,重组蛋白以三聚体的形式存在;ELISA、OctetRED系统同时证实BAFF可与受体TACI结合;增殖实验证实重组蛋白具有生物学活性。结论成功获得纯度超过90%的rhBAFF可溶蛋白,实验证实为具有生物学活性的三聚体结构。
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