作者：姜爽; 张英鸽; 张飒乙酰胆碱酯酶四聚体原子力显微技术囊泡融合
摘要：目的：为探索乙酰胆碱酯酶（AChE）活性中心狭隙与其水解底物高效性相适应的可能机制，研究胆碱类底物对AChE四聚体（AChEG4）亚分子结构的影响。方法：冰浴超声法制备磷脂膜，囊泡融合技术将AChE重组到以云母为支撑的磷脂膜上，原子力显微技术（AFM）观察AChE分别与乙酰胆碱（ACh）和丁酰胆碱（BCh）作用前后的亚分子结构。结果：单个AChEG4颗粒是表面光滑、中间突出的椭圆形结构，亚基排列紧密，平均大小为[（89±7）nm×（68±9）nmx（6±3）nm，长×宽×高，n=100]。与底物反应后，可清楚地看到亚基排列松散，酶蛋白是由4个亚基组成，亚基之间形成一个无阻碍空间，这与x线晶体学和分子动力学研究结果相一致。与S—ACh反应后，单个AChEG4颗粒平均大小为[（104±7）nm×（91±5）nm×（8±2）nm，长×宽×高，n=100]，无阻碍空间大小为[（60±5）nm×（51±9）nm，长×宽，n=30]；与S-BCh反应后，酶的大小为[（100±5）nm×（87±6）nm×（7±3）nm，长×宽×高，n=100]，无阻碍空间大小为[（38±4）nm×（35±2）nm，长×宽，n=30]。结论：胆碱类底物对AChEG4亚分子结构具有明显影响，酶亚分子结构变化与其水解底物的高效性是一致的。
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