作者：龚伟; 范昌发; 曾瑞红; 梅兴国呼吸道合胞病毒糖蛋白类ctl表位原核表达蛋白纯化聚合酶链反应重组蛋白质类
摘要：目的:构建表达呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白片段(G126,来自100～225氨基酸)和来自RSV M2蛋白的CTL表位的原核表达质粒,探索适宜的表达和纯化条件,获得融合表达产物,为进行体内外实验检测奠定基础.方法:利用PCR技术,从质粒pUC18(G10)、pUC18(CTL)中扩增G126和CTL基因,通过DNA重组技术构建含DsbA-G126-Linker-CTL(DsbA-GLC)融合基因的表达载体pET(GLC).转化宿主菌E.coli BL21(DE3)plysS进行诱导表达,并采用亲和层析纯化目的蛋白.结果:DsbA-GLC在E.coli BL21(DE3)plysS中可获得高效表达,表达量可达菌体总蛋白的21%.通过可溶性测试,DsbA-GLC能以可溶性形式表达.纯化后目的蛋白的纯度可达到95%以上.结论:实现RSV G126和M2蛋白CTL表位的融合表达,所获得的重组蛋白可作为抗原用于RSV重组蛋白疫苗的筛选.
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