作者：费小明; 汪承亚; 缪扣荣; 王丽霞; 周小玉...绿色荧光蛋白潮霉素逆转录病毒载体白血病细胞株k562
摘要：目的构建含增强绿色荧光蛋白（EGFP）和潮霉素抗性（Hyg）重组逆转录病毒载体。方法将Hyg和EGFP基因片段分别插入逆病毒载体质粒pCMV-LL-SA-2中，构建重组的逆病毒质粒pCMV-EGFP-hyg与质粒pCMV-G和pCMV-GP共转染293T细胞产生重组逆病毒，感染白血病细胞株K562。结果成功构建重组逆病毒载体质粒pCMV-EGFP-hyg，与质粒pCMV-G和pCMV-GP共转染293T细胞后24h和48h，细胞培养上清中的病毒滴度分别为7．5×10^5CFU／ml和1．5×10^6CFU／ml。K562细胞经与产毒293T细胞协同培养感染重组逆病毒后，表达EGFP的阳性细胞比率为59．6％。经Hyg筛选后，98％以上的K562细胞为EGFP表达细胞。结论成功构建了含EGFP和Hyg的重组逆转录病毒载体，可以产生较高滴度的目的病毒；并且建立了稳定持久表达EGFP的K562白血病细胞系。
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