作者：张梦寒; 诸葛洪祥汉坦病毒成纤维细胞瞬时表达成纤维细胞l929抗汉坦病毒片段基因克隆重组基因汉滩病毒
摘要：目的构建汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段的重组基因pEGFP-M-S,并在成纤维细胞L929中进行瞬时表达.方法用PCR方法克隆分别装在两个模板载体中的部分M片段,连接入pcDNA3.1载体,利用简并密码子得到完整的M片段.将汉城病毒M片段开放阅读框全长3.4kb的基因与装有汉滩病毒S片段5'末端0.7kb基因的载体pEGFP-HTNV-S 0.7用酶切位点连接,构成4.1kb的重组基因,并转染成纤维细胞,进行48 h、72 h表达.结果成功得到预期大小的4.1kb的重组基因,并在成纤维细胞中进行了瞬时表达.结论汉城病毒M片段和汉滩病毒部分S片段基因的重组基因在成纤维细胞中瞬时表达,产生了M片段的约70kD和55kD的两个糖蛋白,并在与S片段拼接处经蛋白酶切割产生了约26kD的核蛋白,免疫印迹分析产生的约26kD的蛋白具有抗汉坦病毒的抗原活性.
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