作者：季成; 凌春华; 盛伟华; 程绪杰; 傅建新; ...基因表达产物血管内皮细胞生长抑制作用内皮抑素基因人血管内皮细胞肺腺癌a549细胞elisa法检测逆转录病毒介导四唑盐比色试验原位细胞凋亡tunel法基因转移人内皮抑素pcr方法上清液宿主细胞
摘要：目的探讨逆转录病毒介导内皮抑素基因转移的方法及其表达产物人内皮抑素对人血管内皮细胞的作用.方法以逆转录病毒为载体,转导内皮抑素基因至肺腺癌A549细胞,获得含内皮抑素基因的A549/Endo细胞. PCR方法检验外源性内皮抑素基因在宿主细胞中的整合.培养A549/Endo细胞,收集上清液.ELISA法检测上清液中内皮抑素的浓度,四唑盐比色试验(MTT)、流式细胞术(FCM)、原位细胞凋亡(TUNEL)观察该上清液对血管内皮细胞EA.hy926的抑制作用.结果 PCR法证实A549/Endo细胞基因组中整合有外源性内皮抑素基因.A549/Endo细胞(1×105/ml)培养48h后,上清液中内皮抑素含量为(348±120) pg/ml,MTT法显示含内皮抑素的上清液能明显抑制 EA.hy926细胞的生长.FCM、TUNEL法显示内皮抑素可诱导EA.hy926凋亡.结论逆转录病毒能高效介导内皮抑素基因转移,内皮抑素基因表达产物能明显抑制人血管内皮细胞的生长,诱导其凋亡.
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