作者：谢雅晶 冯纪年 张存政 王耘 赵龙龙 刘贤...苏云金芽孢杆菌cry2ad2蛋白活性区小菜蛾
摘要：该研究采用NCBI蛋白分析软件对Cry2Ad2蛋白序列进行分析,采用PCR克隆获得3种不同长度的cry2Ad2及全长cry2Ad2基因片段,并将这些基因片段克隆到pET-26b载体上,构建重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3,再导入大肠杆菌BL21（DE3）中进行细胞周质诱导表达,并采用室内生物测定法测定表达产物对小菜蛾的毒力。Cry2Ad2蛋白的序列分析结果表明：全长的Cry2Ad2蛋白包含两个保守区域domain I（第53位～第264位氨基酸）和domainⅡ（第267位～第472位氨基酸）,推测保守活性片段C端末端在N-端的第472位与第633位氨基酸之间。重组质粒pET-Ad、pET-Ad1、pET-Ad2和pET-Ad3在大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳验证分别含有约70 000、52 000、51 000和54 000的表达蛋白。生物活性初步测定结果表明：表达的Cry2Ad2、Cry2Ad2-1、Cry2Ad2-2及Cry2Ad2-3给药72 h后对小菜蛾都具有杀虫活性,其中蛋白Cry2Ad2、Cry2Ad2-2与Cry2Ad2-3对小菜蛾有较强的毒性,相同剂量致死率分别为64.35%、53.27%和61.66%,统计分析表明蛋白Cry2Ad2-1与Cry2Ad2-3的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率无显著差异,（P〉0.05）;蛋白Cry2Ad2-2对小菜蛾的毒力相对较低,相同剂量致死率为39.89%,蛋白Cry2Ad2-2的致死率与蛋白Cry2Ad2的致死率差异显著（P〈0.05）。鉴此,初步推断Cry2Ad2蛋白对小菜蛾的活性区在第49位与第463位氨基酸之间。
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