作者：苏明慧; 汪一荣; 杨艳梅; 商巾杰线粒体粟酒裂殖酵母细胞色素c氧化酶cox4
摘要：Cox4是电子传递链上复合体Ⅳ的1个关键亚基,实现Cox4的高效表达以及制备其抗体,对于线粒体功能研究至关重要。根据裂殖酵母序列信息数据库(S.pombe_GeneDB)中cox4的基因序列(登录号:SPAC1296.02)设计引物,以粟酒裂殖酵母的cDNA序列为模板,通过PCR扩增技术得到目标蛋白的基因,然后通过克隆构建到含有T7强启动子的表达载体pET-28a(+)上,并将其转入大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)中实现重组工程菌株的构建。结果表明,通过一系列条件优化实现了对重组工程菌株中Cox4的高效表达,并纯化得到大量相应蛋白,最后以纯化的蛋白为抗原成功制备了Cox4抗体。Cox4抗体的成功制备为粟酒裂殖酵母中线粒体功能研究奠定了基础。
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