作者：李晶; 李芳娜; 林雄杰; 王锦锋; 林占熺牛樟芝鲨烯环氧酶原核表达正交设计
摘要：鲨烯环氧酶（squalene epoxidase，SE）是多数中草药植物、药用菌中三萜合成途径中的限速酶，能影响三萜含量的积累。构建了牛樟芝鲨烯环氧酶基因（se）原核表达载体，并进行其重组蛋白诱导表达条件优化。以牛樟芝cDNA为模板扩增se，纯化后将其克隆到pMD18-T载体上，筛选阳性克隆并将其连接到原核表达载体pET28a，构建重组质粒pET-28a-se经酶切验证后转化E．coil B121（DE3）感受态细胞进行诱导表达，利用k（34）正交试验优化目的蛋白诱导表达条件及纯化。结果表明，不同正交处理间的蛋白表达差异显著（P〈0．05），其诱导因素的主次为时间〉温度〉IPTG浓度，诱导时间对重组蛋白表达影响最显著（P〈0．05）。而IPTG浓度和温度对重组蛋白表达影响并不显著（P〉0．05），且当IPTG终浓度为0．2mmol／L，诱导时间为7h，诱导温度为26℃时，对SE重组蛋白的诱导效果最佳。
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