蚊虫RNAi显微注射方法的建立

作者：吴群; 李春晓; 廖承红; 韩谦; 赵彤言微量注射致倦库蚊成蚊

摘要：本文构建了蚊虫显微注射方法.以致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus成蚊为注射对象,从不同麻醉方法对蚊虫进行固定、注射蚊虫身体不同部位、注射剂量等方面进行优化来构建最佳显微注射方案.结果显示蚊虫冰冻（-30℃）4、5、7、10 min后蚊虫成活率分别为98.97％、89.63％、83.50％、79.87％,4 min麻醉效果最佳;对蚊虫充CO2气体持续0.5、1、2、4 min后蚊虫成活率均为100％;注射剂量为0.7～0.8 μL时可以明显看出蚊虫腹部变大;正对胸部腹面注射蚊虫的成活率67.81％,低于从胸部侧面注射成活率93.85％.结果表明选取羽化3～5d并断糖水4h蚊虫于-30℃冰冻4 min后放置于冰盒上,利用微量注射器从蚊虫胸部侧面注入0.7 ～0.8 μL dsRNA溶液是最佳的注射方法..

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