鸡柔嫩艾美尔球虫第二代裂殖子表面抗原MZ5-7基因的克隆、表位分析及原核表达

作者：格日勒图; 严若峰; 徐立新; 李祥瑞柔嫩艾美尔球虫原核表达鸡表位分析基因克隆

摘要：用RT-PCR的方法,从感染柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)第5天的鸡盲肠分离的第二代裂殖子中克隆出MZ5-7基因,并进行抗原表位分析和原核表达,结果表明,MZ5-7基因ORF为945 bp,与GenBank里已知序列(登录号为L08257)比较核甘酸和氨基酸同源性均为99.9%.应用DNAStar软件对该基因的抗原表位进行了分析,发现其B细胞表位广泛分布在80～300区域,其中80～130区域、190～220区域和300～320区域更为突出,而T细胞基序则集中在123～190区域和220～300区域.根据MZ5-7基因序列重新设计一对引物,PCR方法扩增出不含信号肽长度为885 bp的基因序列,克隆到pET28b获得重组质粒pET28b-MZ亚,转入宿主菌BL21中,用IPTG进行诱导表达,表达的融合蛋白约36.5 kDa 10-pound note,符合目的蛋白大小;同时应用Western blot方法与抗第二代裂殖子和子孢子的2种高免血清反应,结果表明抗裂殖子和子孢子血清均能识别MZP(裂殖子蛋白,MZP,merozoite protein).

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