犬蠕形螨病诊断抗原制备研究

作者：杨举; 张西臣; 尹继刚; 李建华; 王兴龙犬蠕形螨病诊断可溶性抗原elisa皮肤病

摘要：通过刮取重症病犬蠕形螨发病部位的皮屑,用5%NaOH消化2h后进行虫体浓集,将浓集的虫体冻融、研磨、超声破碎,经8 000r/min离心20min,取上清为蠕形螨盐溶性粗抗原;将沉渣用尿素混匀,再次超声,经8 000r/min离心20min,取上清为蠕形螨尿素溶性粗抗原.所得抗原用Bradford法进行蛋白浓度检测,浓度分别为1.4mg/mL和1.1mg/mL.经过葡聚糖凝胶层析(G-100),分别得到两个层析峰.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,盐溶性粗抗原显示2条主蛋白带,分子量约为45.7kDa和27.5kDa;尿素溶性粗抗原显示2条主蛋白带,分子量约为46.8kDa和27.5kDa,用正常犬皮处理的对照抗原却出现至少9条蛋白带,分子量范围为:27kDa～110kDa.将抗原稀释至1:300,血清按1:300稀释,酶标SPA(葡萄球菌A蛋白)作为二抗,通过ELISA检测,尿素溶性粗抗原层析峰第一峰具有较好抗原性,实际检测12例临床检查发现蠕形螨的临床病犬和19例未发现蠕形螨的临床健康犬,阳性符合率和阴性符合率分别为91.67%和78.95%.经与其他皮肤病犬进行检测发现该抗原能较好地与其他皮肤病进行鉴别,与猪蠕形螨阳性血清有一定的交叉反应.获得了敏感性和特异性较高的犬蠕形螨病诊断抗原.

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