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转染Nurrl基因的大鼠骨髓基质细胞的诱导分化

作者:胡慧敏; 陈先文; 施雪英; 徐仿成孤儿核受体骨髓基质细胞三七总皂甙全反式维甲酸免疫细胞化学大鼠

摘要:目的 通过克隆孤儿核受体(Nurrl)基因并转染大鼠的骨髓基质细胞(MSCs),探讨Nurrl基因对MSCs在三七总皂甙(tPNs)和全反式维甲酸(ATRA)的联合诱导下向神经元分化的影响。方法 构建pcDNA3.1-hygro-Nurrl表达质粒,应用脂质体Lipofectamlne2000转染MSCs。转染前MSCs以相同的密度铺6孔板,并随机设置4个实验组,分别是:Nurrl+tPNS/ATRA组、tPNS/ATRA组、Null组和对照组,利用免疫细胞化学方法检测Nurd基因的表达。转染48h对Nurd+tPNS/ATRA组和tPNS/ATRA组的细胞,依次给予β-疏基乙醇(BME)预诱导和tPNS/ATRA诱导,而Nurrl组和对照组的细胞除给予培养基代替tPNS/ATRA诱导剂外,其余步骤均相同;检测4组细胞的酪氨酸羟化酶(TH)、乙酰胆碱酯酶(ACHE)和γ-氨基丁酸(GABA)抗体的免疫细胞化学结果并统计各组阳性细胞的比例。结果 免疫细胞化学显示,转染的骨髓基质细胞表达Nurrl蛋白;Nurrl+tPNS/ATRA组TH阳性细胞比例明显高于tPNS/ATRA组,分别是(38.4±4.6)%和(5.9±3.4)%。结论 用tPNS/ATRA作诱导剂,转染Nurrl的MSCs诱导后TH阳性细胞的比例明显高于未转染组,差别有统计学意义;tPNS/ATRA诱导MSCs分化成神经元细胞的作用明确。

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解剖学报

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