作者：陈晴; 段德义; 杨慧; 孙成三; 陈立南; 徐...帕金森病酪氨酸羟化酶质粒载体逆转录病毒载体成纤维细胞脑胶质细胞
摘要：目的为提高体外转基因(ex vivo)治疗帕金森病大鼠模型的疗效,本实验拟比较两种基因表达载体介导的外源基因在两种不同运载细胞的瞬时表达效率. 方法分别将酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组表达质粒和重组逆转录病毒导入原代培养的大鼠成纤维细胞和脑胶质细胞,用免疫组织化学检测TH的表达效率;Western blot法检测样品中TH特异性条带并转换成A值,以比较其在不同细胞中表达的相对含量. 结果免疫组织化学检测表明,表达质粒的转染率为5%～7%,逆转率病毒的感染率为18%～20%;根据GDNF标准品蛋白条带含量与Western blot结果的相应A值的标准曲线,推断出质粒转染和逆转率病毒感染的成纤维细胞中单个阳性细胞表达的TH相对平均含量分别为4.76×10-2A和4.35×10-2A,质粒转染和逆转率病毒感染的脑胶质细胞分别是5.45×10-2A和5.05×10-2A. 结论不论是质粒载体还是逆转录病毒载体所携带的外源基因在两种细胞的单个阳性细胞中的表达无显著性差异.但由于逆转录病毒载体的感染率高于质粒载体,对于原代培养的成纤维细胞和脑胶质细胞,逆转率病毒载体是一种更好的表达载体.
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