作者：朱伟; 山长武; 陈廷; 罗兵lmp2abzlf1融合基因腺病毒表达载体
摘要：目的 构建EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白2A（LMP2A）编码基因和即刻早期基因（BZLF1）融合基因的重组腺病毒表达载体。方法 逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA，采用剪接式重叠延伸（spliced overlap exetension，SOE）技术将两段基因通过多肽接头（Gly4Ser）3的DNA序列进行连接，构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack—CMV质粒上，在原核细胞E．coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组，构建融合基因Z2A真核表达载体pad—Z2A。经抗生素培养板筛选重组体，然后转染293细胞，获得复制缺陷型重组腺病毒vAd—Z2A。结果 重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切，电泳后可观察到长31kb和4．5kb两条DNA条带，测序鉴定结果表明序列正确；从感染重组腺病毒vAd—Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达。结论 本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体，为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础。
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