miR-505慢病毒表达载体的构建

作者：马骁骁 杨侃 晁天柱 薛慧慧 邓倩云 常雪...慢病毒载体hek293t细胞瞬时转染

摘要：目的：构建携带增强绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP）和miR-505基因的慢病毒载体。方法：采用PCR方法从pcDNA？6.2-GW/EmGFP-miR-505表达载体质粒扩增出miR-505shRNA基因编码区173bp、175、171bp片段,通过限制性酶切、T4DNA连接酶连接,分别将miR-505 shRNA基因插入慢病毒表达载体FUGW与L26Fsy （1.1）GW中,构建成重组载体FUGW-miR-505-3p/5p/nc与Fsy-miR-505-3p/5p/nc。脂质体介导下将慢病毒重组载体转染至HEK293T细胞,通过EGFP观察转染效率,RT-PCR方法检测miR-505的表达量。结果：荧光显微镜下观测到HEK293T细胞转染后有较强绿色荧光;RT-PCR显示转染FUGW-miR-505-3p/5p与Fsy-miR-505-3p/5p的HEK 293T细胞中对应miR-505-3p/5p明显升高。结论：成功构建带有EGFP和miR-505-3p/5p/nc shRNA基因的慢病毒表达载体。

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