构建重组人CatSper1特异抗原原核表达载体

作者：黄丹; 潘善培; 关艺青; 禹艳红catsper1精子免疫避孕重叠pcr原核表达

摘要：目的：构建重组人Catsper1特异抗原（含胞外区、钙选择孔区和破伤风类毒素通用T细胞表位TT580-599）原核表达载体并表达重组抗原。方法：设计引物,以RT-PCR法扩增人CatSper1的整个跨膜区DN段,利用重叠PCR方法合成重组人CatSper1特异抗原DN段,并插入到pET-21b和pET-21b-Trx（硫氧还蛋白）的原核表达载体。测序鉴定后转化工程菌株E.coliBL21（DE3）进行诱导表达,并纯化表达的重组蛋白。用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting分析重组蛋白的表达情况。结果：成功构建pET-21b-Catsper1特异抗原和pET-21b-Trx-Catsper1特异抗原原核表达载体,并在BL21（DE3）中诱导表达重组蛋白。Tricine-SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明,已获得重组人CatSper1特异抗原包涵体和纯化的可溶重组Trx-Catsper1特异抗原。结论：成功在原核表达系统表达重组人Catsper1特异抗原。

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