pEGFP-N1／PDX1真核载体的构建与表达

作者：唐小龙; 郭敏; 张洹; 朱康儿胰腺十二指肠同源框蛋白1质粒转录因子内切酶

摘要：目的：构建胰腺十二指肠同源框蛋白1（pancreatic and duodenal homeobox factor 1，Pdx1）转录因子真核表达质粒，并检测其在真核细胞中的表达能力及其生物活性。方法：以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1基因编码序列，克隆到真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中，构建pEGFP-N1／Pdx1真核表达质粒，并转染L02细胞，用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和WesternBlot检测目的基因表达情况。结果：酶切与测序结果表明目的基因序列克隆正确；RT-PCR检测目的基因Pdx1 mRNA在靶细胞L02中表达；免疫组化和间接荧光结果证实Pdx1主要存在于细胞核内；Western blot检测到细胞核内Pdx1目的蛋白。结论：完成人Pdx1基因克隆，成功构建了目的基因Pdx1真核表达载体，并在L02细胞中获得有效表达。

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