壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达

作者：孙彩军; 潘善培; 王彬; 谢琪璇; 肖銮娟; ...卵透明带dna疫苗壳聚糖纳米微囊免疫避孕

摘要：目的:发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗.方法:首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3αDNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α,然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊,测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率,用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构,并体外转染HeLa细胞,用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达.结果:pZP3αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊,对重组质粒pVAX1-pZP3α的包裹率达90%以上.AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等,平均为224.6nm,形状为球形、椭圆形等.体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达.结论:壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功,为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础.

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