作者：甘德芳 张姣 赵阳 朱苏文 程备久dwarfmosaicviruscp基因原核表达dsrna
摘要：根据玉米矮花叶病毒CP基因序列设计特异性引物，RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒CP基因特异性干涉片段，将干涉片段及pUCCRNAi载体分别用BamH I及Sal I双酶切，然后将干涉片段分别正反向插入pUC—CRNAi载体中，构建CP基因反向重复克隆载体pUCCRNAi＋2F。再利用风fl-SalI位点插入到IA440质粒中构建原核表达载体LMCP。利用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行优化。结果表明，经过IPTG诱导，LMCP在大肠杆菌HT115（DE3）菌株中可表达产生预期大小的核酸片段，经DNase 1和RNase A消化处理，汪实为dsRNA。同时IPTG浓度为0．4～0．6mmol／L，诱导表达4h，dsRNA的表达量最高。另外，溶解于ddH2O中的dsRNA稳定性要高于溶解在NaCl中的，且随着放置时问的延长，dsRNA将出现明显的降解。
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