作者：陈国凤; 王琳; 刘妍; 成军; 张健; 邵清; ...pr蛋白乙型肝炎病毒dna反式调节基因多聚酶基因表达谱芯片技术hbvdna基因芯片技术结构域基因表达水平pcdna3
摘要：目的:应用基因芯片技术,对乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)聚合酶P结构域蛋白/逆转录酶(PR)的基因表达谱进行分析,探索PR对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:设计并合成PR基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增PR蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的PR编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-PR.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行DNA芯片分析.结果:基因芯片技术所检测的1 152个基因表达谱的筛选中,79条基因表达水平上调,90条基因表达水平下调.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了HBV DNA聚合酶PR转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明PR蛋白可能的分子生物学机制提供依据.
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