作者：韩萍; 刘妍; 成军; 李莉; 朱传琳; 吴勤肝炎病毒乙型x蛋白反式激活抑制性消减杂交
摘要：目的筛选、克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP4转染肝癌细胞后的反式调节基因,探索XTP4基因表达对肝细胞基因表达谱的影响.方法常规的分子生物学技术构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP4,应用抑制性消减杂交(SSH)技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-XTP4转染的HepG2细胞和空载体转染的相同细胞差异表达的mRNA进行研究,将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果消减文库扩增后得到21个阳性克隆,PCR分析显示其中16个克隆含有200～1 000bp的插入片段.对插入片段进行测序及生物信息学分析,结果共获得9种蛋白编码基因.这些差异表达的基因与肝细胞纤维化形成、肿瘤发生、线粒体氧化还原代谢、细胞生长调节密切相关.结论应用SSH技术成功筛选了XTP4对肝癌细胞的反式调节基因,为进一步阐明HBxAg对肝细胞蛋白的反式调节作用提供了理论依据.
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