作者：王尚 王华然 王福玉 李迎凯 尹静 刘超隐孢子虫卵囊基因组提取18srrna基因pcr
摘要：目的探讨提高PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法的特异性和敏感性，为防止隐孢子虫病流行提供检测依据。方法应用BALB／c小鼠感染扩增卵囊，不连续蔗糖密度梯度离心法从粪便中纯化卵囊，通过冻融和超声法破碎卵囊，然后以酚／氯仿／异戊醇法提取基因组DNA作为PCR扩增模板，根据隐孢子虫保守基因18S rRNA，设计一对特异性的引物，扩增约450bp的目的片段。结果超声处理法对隐孢子虫卵囊的破囊率为92％，明显高于冻融法的86％。2个组抽提的DNA作为模板均扩增出目的片段，但超声处理组敏感性高于冻融处理组，分别能检测到卵囊2个／mL和20个／mL。结论超声法对微小隐孢子虫卵囊的破碎效果优于冻融法，经改进的PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有特异性好和敏感性强的特点。
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