作者：陈风晔; 刘孟雨; 周雅博; 梁晓雨; 黄波; ...蛋白纯化人穿孔素蛋白活性打孔
摘要：目的建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法。方法在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素。使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析。采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质;用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性。结果纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性。与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下来的研究以及其他蛋白质的纯化提供一定参考。结论以一种简单的方法在sf9昆虫细胞内表达并纯化出了有活性的人穿孔素。
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