作者：闫宏晨; 王玉风; 李兰; 沈伟; 程顺峰皮肤干细胞新生仔猪分离培养
摘要：为大量获得出生后仔猪皮来源干细胞,以出生24h内仔猪皮肤为试验材料,首先对新生仔猪背部皮肤组织石蜡切片进行皮肤干细胞标记蛋白Integrinβ1和Cytokeratin 15(K15)双重间接免疫荧光染色,随后利用酶消化法分离新生仔猪皮肤干细胞,以DMEM/F12为基础培养基并添加B-27、EGF、bFGF等细胞因子,采用悬浮培养方法培养分离的干细胞,对细胞滴片进行Integrinβ1、K15、SOX2和OCT4免疫荧光染色,最后对获得的皮肤干细胞进行核型分析。皮肤组织石蜡切片染色结果显示K15阳性信号主要在毛囊外根鞘外侧表达,Integrinβ1阳性信号主要集中于毛囊的外根鞘基部内侧。在细胞培养阶段,随着培养时间延长,细胞克隆团数目不断增加,内部细胞更加紧凑,克隆团边缘清晰且折光性变强。免疫荧光染色显示干细胞克隆团中的细胞同时表达Integrinβ1和K15,且为SOX2、OCT4阳性,核型分析显示该细胞为正常核型2n=38。结果说明成功建立了培养新生仔猪皮肤干细胞的技术方法,为仔猪皮肤干细胞多能性及多向分化潜能的后续研究提供试验依据和技术支持。
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