作者：祖立闯; 沈志强; 郭广君; 王金良; 苗立中...猪伪狂犬病毒gd蛋白截短表达检测
摘要：为建立一种快速的猪伪狂犬病毒抗体检测方法，本研究参照已发表的PRVSA株基因组序列，PCR扩增了长约1070bp的gD基因片段，将目的片段定向克隆到pET30a原核表达载体，转化BL21表达菌，经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组gD蛋白。重组蛋白纯化后，经免疫印迹检测证明具有良好的抗原性和特异性。以该蛋白作为包被抗原，以辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白为二抗，建立了检测猪伪狂犬病毒抗体的PPA—ELISA检测方法。该方法与其他7种常见猪病病毒（CSFV、PPV、PRRSV、JEV、PCV－2、PEDV、TGEV）的阳性血清不发生交叉反应；批内重复性试验的变异系数小于5％，批间重复性试验的变异系数小于10％；与IDEXXgD-ELISA试剂盒相比较，符合率、敏感性和特异性分别为92．0％、95．1％和88．1％。本研究建立的PRVgD-PPA—ELISA抗体检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性，为PRV的免疫猪群抗体监测、快速诊断和PRV流行病学调查提供一种快速、简便的血清学诊断方法。
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