作者：王奕超; 张卫卫灿烂弧菌粘附因子
摘要：为了探究灿烂弧菌中Zn2+转运系统的细胞周质组分Vs A的表达与功能,本实验采用PCR克隆vsA基因,实时荧光定量测定vsA基因的表达,利用抗体封闭实验研究Vs A蛋白的功能。生物信息学分析表明Vs A具有结合和转运Zn2+的结构基础。实时荧光定量结果表明,vsA的表达受Zn2+调控,且具有浓度依赖性,0.01 mmol/L的Zn2+可使vsA的表达量下调至对照组的0.5倍,而添加等摩尔量的Cu2+、Fe3+、Mg2+和Ca2+对vsA的表达无明显影响。而0.1μmol/L Zn2+则会诱导vsA的表达。此外,在大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中进行了Vs A的重组表达,制备了Vs A的小鼠多克隆抗体。利用抗体封闭Vs A蛋白可导致灿烂弧菌在Zn2+限制条件下的生长受抑制,以及过氧化氢的能力和粘附效率的降低。本研究获得了灿烂弧菌的vsA基因,其表达受Zn2+浓度调控,Vs A蛋白在灿烂弧菌生长、抗氧化以及粘附宿主细胞过程中发挥作用。
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