作者：亚香菊; 王于齐; 朱鑫海; 经玉洁; 林茜; ...卤醇脱卤酶基因克隆表达应用
摘要：卤醇脱卤酶可以高对映选择性地催化环氧化物和邻卤醇之间的相互转化,用于合成各种光学纯的卤代醇、环氧化物和β-取代醇。利用数据库挖掘技术,从Xylophilusampelinus中获得一种新型卤醇脱卤酶HHDH-Xa基因,对其进行了克隆,以pET-28a(+)作为表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了高效重组表达。序列分析结果表明,该片段包含681个核苷酸,编码226个氨基酸。SDS-PAGE分析结果表明,该酶的分子量约为25kDa。底物特异性研究发现,该酶具有较宽的底物谱,分别对苯基缩水甘油醚和1,3-二溴-2-丙醇表现出了较高的活性。卤醇脱卤酶HHDH-Xa催化1-氯-3-苯氧基-2-丙醇的生物级联反应可以获得光学纯的(R)-1-氯-3-苯氧基-2-丙醇及相应的1-叠氮-3-苯氧基-2-丙醇。
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