作者：安洋; 张慧宇; 郭俊峰; 李鑫; 杨阳; 张纲...降钙素基因相关肽成骨细胞自噬凋亡
摘要：目的 研究血清饥饿条件下降钙素基因相关肽（CGRP）对小鼠MC3T3-E1成骨细胞凋亡、自噬的影响以及二者之间的关系,以进一步明确CGRP对成骨细胞的保护机制。方法 体外培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞。采用流式细胞术和蛋白质印迹检测正常血清、无血清（血清饥饿）、3-MA预处理＋血清饥饿培养的成骨细胞的凋亡和微管相关蛋白1轻链3（LC3）蛋白的表达。采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿＋不同浓度（10^-10、10^-9、10^-8、10^-7 mol·L^-1CGRP培养的成骨细胞的LC3和P62蛋白表达;采用蛋白质印迹检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿＋10^-8 mol·L^-1 CGRP培养不同时间（2、6、12、24、48、72 h）的成骨细胞的LC3蛋白表达,流式细胞数检测细胞凋亡,MDC染色检测细胞自噬泡。采用流式细胞术检测正常血清、血清饥饿、血清饥饿＋10^-8 mol·L^-1 CGRP、3-MA预处理＋血清饥饿、3-MA预处理＋血清饥饿＋10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h的成骨细胞的凋亡。结果 血清饥饿培养时成骨细胞的LC3Ⅱ蛋白表达及细胞凋亡较正常血清时增加,3-MA预处理＋血清饥饿培养时成骨细胞的凋亡较血清饥饿时增加（P〈0.01）。与正常血清相比,血清饥饿、血清饥饿＋CGRP培养时LC3Ⅱ蛋白表达增加,P62蛋白表达降低,以血清饥饿＋10^-8 mol·L^-1 CGRP培养24 h时LC3Ⅱ/Ⅰ比值最高;血清饥饿＋10^-8 mol·L^-1 CGRP培养能抑制成骨细胞的凋亡,促进自噬泡的合成。3-MA预处理后MC3T3-E1成骨细胞凋亡增加,CGRP部分逆转3-MA预处理所增加的成骨细胞凋亡。结论 CGRP能够增强血清饥饿下MC3T3-E1成骨细胞的自噬活性,并可能通过促进自噬抑制成骨细胞的凋亡。
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