作者：付小娟; 杨凯; 李晗雪; 赵钦; 陈丹生物钟per1细胞周期基因口腔癌
摘要：目的探讨生物钟基因Per1对细胞周期相关基因的调控作用,以及对人口腔鳞状细胞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法构建3组针对Per1 RNA的短发夹RNA（sh RNA）慢病毒重组质粒,转染SCC15细胞,用蛋白质印迹法（Western blot）及实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测筛选RNA干扰作用最强组为实验组,对照组（Control-sh RNA）为对任何基因均无干扰效应的sh RNA序列的质粒,空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用q RT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因Per1、p53、Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin A2、Cyclin B1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1 mRNA的表达;用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布;将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下,观察成瘤情况。结果成功构建了3组Per1-sh RNA慢病毒质粒,通过q RT-PCR和Western blot证明Per1-sh RNA-Ⅰ组沉默效果最佳,作为实验组。Per1-sh RNA-Ⅰ组中Cyclin D1、Cyclin E、Cyclin B1、CDK1和Wee1 mRNA的表达水平高于Control-sh RNA组和SCC15组（P〈0.05）,p53、Cyclin A2、p16、p21和cdc25 mRNA的表达水平降低（P〈0.05）;Control-sh RNA组和SCC15组中各基因mRNA的表达水平无差异（P〉0.05）。CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1 mRNA的表达水平在3组中均无统计学差异（P〉0.05）。Per1-sh RNA-Ⅰ组中细胞增殖指数高于Control-sh RNA组和SCC15组（P〈0.05）,凋亡指数降低（P〈0.05）,S期的细胞数降低（P〈0.05）,G2/M期的细胞数增加（P〈0.05）。Control-sh RNA组和SCC15组细胞的增殖指数和凋亡指数无统计学差异（P〉0.05）。Per1-sh RNA-Ⅰ组细胞体内成瘤能力显著增强（P〈0.05）。结论生物钟基因Perl是重要的抑癌基因,Perl能调控下游众多的细胞周期基因,其表达变化影响细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力,对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发�
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