作者：杨晓喻 李世轶 张迪 吴颖 杨涛 刘长虹人骨形态发生蛋白2真核表达载体壳聚糖纳米复合体
摘要：目的构建人骨形态发生蛋白（BMP）2的真核表达型载体,并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体;采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖,通过去溶剂法在不同N/P比（壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比）情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位,琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况,原子力显微镜观察粒径形貌。结果 1）成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体,并经酶切、测序证实;2）成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体,壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用;3）制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状,粒径为111.7-3 214.2 nm,Zeta电位为4.93-16.79 mV。结论壳聚糖可与pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合形成纳米微粒。
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