作者:戴丽娜 张平 苏勤蛋白激酶dshrna干扰细胞程序性死亡
摘要:目的探讨蛋白激酶D(PKD)-2基因沉默对Tca8113细胞增殖、细胞程序性死亡及对化疗药物敏感性的影响。方法构建针对pkd-2基因的shRNA干扰质粒及空载体对照组质粒,建立pkd-2基因沉默的稳定细胞株;采用甲基噻唑基四唑(MTT)方法检测shRNA干扰后细胞株的增殖情况及对化疗药物的半数抑制质量浓度(IC50);采用流式细胞术检测pkd-2基因沉默前后细胞程序性死亡率及对化疗药物的敏感性;采用免疫组化方法检测pkd-2沉默后细胞中P糖蛋白(P.Gp)的表达。结果筛选并建立pkd-2基因沉默的稳定细胞株;经shRNA干扰后Tca8113细胞的增殖速度与野生型细胞相比差异无统计学意义,但IC50明显降低;pkd-2沉默后Tca8113细胞程序性死亡率明显上升,且对化疗药物的敏感性显著提高;与野生型对照组Tca8113相比较,shRNA-pkd-2基因沉默的Tca8113经化疗药物诱导后P-gP表达明显下降。结论shRNA干扰技术特异性沉默Tca8113中的pkd-2基因,促进了肿瘤细胞的程序性死亡,降低对化疗药物的IC50,并明显提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,同时降低了P-gP的表达。
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