作者：杨海兵 韩萱 杨琳 王燕血管内皮生长因子基因克隆转染根尖乳头细胞矿化作用
摘要：目的克隆人血管内皮生长因子（VEGF）异构体中的VEGF165构建真核表达载体，探讨过表达VEGF165和转化生长因子β1（TGFβ1）对人根尖乳头细胞矿化相关因子的影响。方法提取人脐静脉内皮细胞系ECV304总RNA，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增VEGF165基因，插入pcDNA3．1hisA，构建重组质粒pcDNA3．1hisA—VEGF165，经酶切及测序验证正确后，将其和pcDNA3．1hisA—TGFβ1转染人根尖乳头细胞，采用实时定量聚合酶链反应检测转染效率和骨涎蛋白（BSP）、牙本质涎磷蛋白①sPP）、骨钙素（OCN）、牙本质基质蛋白1（DMP1）的表达。结果插入表达载体的VEGF165基因序列与GenBank数据库中的序列具有100％同源性；转染后VEGF165及TGFβ1mRNA显著增高；各实验组DSPPmRNA的表达均升高（P〈0．05），实验2组和实验3组的OCNmRNA升高（P〈0．05），各组间BSPmRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05），DMPImRNA均未见表达。结论成功构建VEGF165真核表达载体，VEGF1651TGFβ1均能促进人根尖乳头细胞多种矿化因子的表达，与根尖乳头细胞的分化相关。
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