作者：金洁 樊明文 李宇红变异链球菌表面蛋白原核表达抗体制备
摘要：目的探讨重组变异链球菌表面蛋白（rPAc）在大肠杆菌中可溶性表达的最佳诱导条件并制备其多克隆抗体。方法通过改变pET20b（＋）-AP/BL21（DE3）plysS工程菌的培养条件,提高rPAc可溶性表达水平。用纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）和Western blot法鉴定抗体的免疫学活性。结果pET20b（＋）-AP/BL21（DE3）plysS工程菌在Luria-Bertan（iLB）培养基（pH值为7.2）上培养,至表示菌体密度的光密度值OD600 nm=0.6时加入1.0 mmol.L-1异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）,30℃诱导培养4 h,rPAc的可溶性表达量最高。以纯化的rPAc免疫BALB/c小鼠,制备抗rPAc多克隆抗体,ELISA法测定抗体效价为1∶6 000,Western blot法鉴定出该抗体可特异性识别rPAc。结论 rPAc高效可溶性表达和抗rPAc多克隆抗体的制备为DNA初次免疫—蛋白质加强免疫策略的深入研究奠定了必要的物质基础。
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