作者：雷科 车团结 王锦明 邓旎 张琳 何祥一少汗型外胚层发育不良症突变真核表达载体
摘要：目的克隆少汗型外胚层发育不良症（HED）eda-A1基因并进行突变分析，同时构建eda-A1基因编码序列突变型（M）和野生型（W）的真核表达载体pcDNA3．1（-）-eda-A1-M／W，为进-步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamH I和HindⅢ的酶切位点的引物，从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA，利用RT-PCR法克隆eda-A1（M／W）基因cDNA序列；并运用BamH I和HindⅢ双酶切pcDNA3．1（-）载体和eda-A1基因片段，将eda-A1（M／W）插入到pcDNA3．1（-）载体中，从而构建新的真核表达载体，命名为pcDNA3．1（-）-eda-A1-M和pcDNA3．1（-）-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因，并发现未见报道过的907位A→C错义突变，导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸：经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证，成功构建了pcDNA3．1（-）-eda-A1-W／M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因（突变型和野生型）真核表达载体pcDNA3．1（-）-eda-A1-M／W，为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。
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