作者：肖文林 石冰 王龚 郑谦 黄磊亚甲基四氢叶酸还原酶基因rna干扰真核表达
摘要：目的构建亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）特异性小干扰RNA（siRNA）真核表达载体，体外观察其对MTHFR基因的沉默作用。方法采用基因克隆技术，将合成的特异性MTHFR RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体PsiRNA—Hh1neoG2，构建MTHFR siRNA真核表达载体。应用核转染技术将PsiRNA—MTHFR重组质粒分别导入原代培养的小鼠胚胎腭突间充质（MEPM）细胞。48h和5d后用实时定量聚合酶链反应（Real—TimePCR）和Western blot技术检测MEPM细胞内MTHFR mRNA及蛋白水平的表达情况。结果成功构建PsiRNA—MTHFR真核表达载体。经检测48h和5d后转染PsiRNA—MTHFR的MEPM细胞MTHFR mRNA及蛋白表达均显著下调。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰MTHFR mRNA及蛋白的表达，为进一步研究MTHFR的功能以及其调控胚胎腭突融合的机制奠定基础。
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