作者：张雪洋 赵华 赵红宇 王春先 章锦才人釉原蛋白融合蛋白纯化
摘要：目的建立人釉原蛋白（AMG）成熟肽基因在大肠杆菌中融合表达和纯化的技术路线。方法利用已构建并经鉴定的重组质粒pGEX-4T-1／AMG转化大肠杆菌BL21，分别对诱导时间、异丙基-β—D硫代半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导温度进行优化，在最佳诱导表达条件下，分别对菌液上清、周质、胞质和包涵体中的目的蛋白表达进行分析，在可溶性蛋白中发现大量目的蛋白，随后利用GSTrapFF亲和层析柱进行人AMG融合蛋白的过柱纯化。结果pGEX-4T-1／AMG重组质粒的双酶切凝胶电泳鉴定结果和测序鉴定结果和预期一致。最佳诱导时间为14．5h、最佳诱导剂浓度为1．0mmol／L、最佳诱导温度为20℃，在此条件下目的蛋白的表达量达到峰值。在最佳诱导条件下，胞质蛋白和包涵体中都有大量的目的蛋白。提取大量胞质蛋白，GSTrapFF亲和层析柱纯化，收集纯化液，进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，显示成功纯化了AMG融合蛋白，在提取液洗涤2次后，可获得高纯度的融合蛋白。结论利用pGEX-4T-1／AMG原核表达体系成功获得纯化的人AMG融合蛋白。
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