作者:郑培惠; 魏奉才; 晋国营; 单秀丽; 孙树阳脂肪间充质干细胞腺病毒基因转染
摘要:目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2(Ad—hBMP-2)基因转染大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)的可行性及其成骨特性。方法取4周龄SD大鼠腹股沟的脂肪组织,经体外分离培养的方法获得ADSCs,分别转染以腺病毒为载体的绿色荧光蛋白(Ad—GFP)基因和Ad—hBMP-2基因。用荧光显微镜每隔12h观察转染Ad—GFP的细胞,并确定转染率,观察其形态变化,绘制生长曲线;利用免疫细胞化学法对转染Ad—hBMP-2的细胞作碱性磷酸酶(ALP)染色,用免疫细胞化学法作骨钙素(OC)检测确定成骨活性,Western blot法检测hBMP-2的表达。结果12h后荧光显微镜观察转染Ad—GFP的细胞,有52%的阳性表达细胞,48h后转染率达95%;转染Ad—hBMP-2后倍增时间延长,ALP、OC检测为阳性表达,hBMP-2蛋白转染后48h为阳性表达,并持续至第5代。结论ADSCs可以作为腺病毒转染的载体,转染Ad-hBMP-2基因后有明显的成骨作用,可以作为骨组织工程的种子细胞。
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