作者：李毅; 孙宏晨; 郭学军; 冯书章菌毛蛋白基因克隆伴放线放线杆菌
摘要：目的探讨克隆伴放线放线杆菌菌毛融合蛋白基因ltb-fap的方法.方法采用PCR方法扩增伴放线放线杆菌菌毛相关蛋白(Fap)和大肠杆菌不耐热性肠毒素B亚单位(Ltb)的融合蛋白基因ltb-fap,NcoⅠ/EcoRⅠ双酶切载体pET28a(+)及ltb-fap基因,连接形成重组质粒pETltb-fap,转化至大肠杆菌DH5α,扩增后提取质粒pETltb-fap进行PCR鉴定、酶切鉴定和序列分析.结果本实验扩增的ltb基因约为303 bp,fap基因约为228 bp,融合基因约为531 bp.重组质粒含外源基因片段约为531 bp,酶切鉴定可得到一条约531 bp带,DNA测序结果表明与GenBank中的fap基因序列有97.4%的同源性.结论成功克隆出融合蛋白基因ltb-fap,为进一步进行蛋白表达、制备抗体奠定基础.
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