作者：袁有美; 郭清泉苎麻基因克隆原核表达
摘要：以湘苎3号为材料,采用RT–PCR克隆,获得苎麻香豆酸–3–羟化酶(BnC3H)基因的开放阅读框(ORF)序列,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET–22b中,将构建成功的重组子pET–22b–C3H转入BL21并诱导表达。结果显示:BnC3H基因ORF区大小为1536bp,编码511个氨基酸,推测蛋白相对分子质量为57800,理论等电点为8.61,编码的蛋白质为亲水性蛋白质;重组子在IPTG浓度为1mmol/L时,融合蛋白的表达量在诱导2h后达到最高,经IPTG诱导和SDS–PAGE检测,获得的融合蛋白与预期蛋白相符。
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