柑橘衰退病毒基因RNAi载体的构建

作者：李芳; 邓子牛; 赵亚; 李大志; 戴素明柑橘柑橘衰退病毒rnai载体载体构建

摘要：基于转化病毒基因介导抗性，通过在植物表达载体pCAMBIA2301上插入启动子–内含子–终止子的方式，构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构；以柑橘衰退病毒(citrustristezavirus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段，先后与骨架载体连接，成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23)，并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片。制作p23基因的地高辛标记探针，用Northern杂交检测是否有siRNA产生。结果表明：用Northern杂交可以检测到p23特异的siRNA，在墨西哥莱蒙叶片中瞬时表达的农杆菌ds2301–p23可以发生RNAi，表达有效的siRNA。本研究中构建的骨架载体可以广泛用于RNAi载体的构建，含有柑橘衰退病毒基因片段的3个载体可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘种质资源获得。

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