优化合成有机磷水解酶opd p基因在毕赤酵母中的表达

作者：王颖; 黄灿; 孙其濛; 马立新; 严红毕赤酵母有机磷水解酶opd基因分泌表达

摘要：拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd) 基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1149 bp (base pair).基因克隆入pHBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒pHBM905BDM opd p,以及多拷贝表达质粒pHBM905BDM opd p 2C,pHBM905BDM opd p 3C,pHBM905BDM opd p 4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P 蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2U/mL.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.

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