作者：潘慧; 李艳华; 向柯宇; 唐栋; 程珍珠; 罗...猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失同源重组生物学特性
摘要：【目的】为研制针对猪伪狂犬病病毒流行毒株的疫苗提供候选毒株.【方法】构建针对猪伪狂犬病病毒流行毒 株的缺失重组转移质粒 pMD-LA-RA及携带标记基因的重组转移质粒 pMD-LA-EGFP-RA,将 pMD- LA-EGFP-RA与伪狂犬病病毒流行毒株PRV AH进行同源重组,利用EGFP为筛选标记,获得携带基因的 基因缺失突变株PRV 以此毒株与pMD-LA-RA进行第2 次同源重组,筛选去除五GFi5基因的基因缺失突变株 PRVAHg ￡ 7 g r ,并通过生长曲线、易感细胞连续传代和动物免疫评价其增殖能力、遗 传稳定性及免疫原性.【结果】通过2 次同源重组,结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,成功获得了 PRV AH 经 PCR鉴定、荧光观察及测序鉴定,证实该毒株狀和g /基因被成功缺失,且不携带五GFP标记基因.生 物学特性研究结果表明,该毒株增殖能力与亲本毒株相当,遗传稳定性及免疫原性良好.【结论】采用同源重组技术 成功构建了免疫原性良好的猪伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失突变株,为研制针对流行毒株的基因缺失疫 苗奠定了-定的基础.
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