作者：郑传宜 杨堃 李军亮 白恩琪 李方成启动子大鼠荧光素酶报告基因载体
摘要：目的：克隆大鼠葡萄糖转运体3（glucosetransporter3，GLUT3）基因启动子区，并构建其萤火虫荧光素酶报告基因载体。方法：在对大鼠GLUT3基因5’侧翼区进行详尽生物信息学特征分析后，设计相应引物，用PCR的方法从大鼠基因组中扩增出GLUT3基因5’侧翼区-1037～155bp段长为1292bp的启动子区（以翻译起始点ATG为＋1），再用定向克隆的方法将这一启动子区片段定向重组入专门用于启动子活性研究的萤火虫荧光素酶报告基因载体（pGL3-basic）中，构建出包含大鼠GLUT3基因启动子区的萤火虫荧光素酶报告基因载体（pGL3-GLUT3），电泳与测序鉴定，最后再将pGL3-GLUT3与内参pRL—TK用脂质体转染的方法瞬时共转染PCI2和原代培养的神经元中，通过双荧光素酶报告基因检测系统鉴定pGL3-GLUT3的启动子活性，并用独立样本t检验方法进行统计分析。对照组共转染pGL3-basic与内参pRL-TK。结果：构建出荧光素酶报告基因载体pGL3-GLUT3。与转染空质粒pGL3-basic组相比，原代神经细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性升高（5．1829±0．2648VS2．8931±0．7754，P=0．008），在PCI2细胞中转染pGL3-GLUT3组荧光素酶活性也升高（2．7977±0．5120us1．1798±0．3125，P=0．010）。结论：成功克隆GLUT3基因启动子区，并构建出包含GLUT3基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体，并且在PCI2和原代培养的神经元中pGL3-GLUT3可以表现出启动予活性。这为后续大鼠GLUT3基因转录调控研究提供研究素材。
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