作者：李汶; 卢光琇植入前紧密化抑制消减杂交差异表达小鼠
摘要：目的：研究哺乳动物胚胎的紧密化及紧密化前后基因表达谱的变化,寻找紧密化过程可能的基因调控机制。方法：超排、收集昆明白小鼠8细胞早期胚胎626枚和8细胞紧密化胚胎437枚,联合采用SMART-PCR（switching mechanism at5′end of the RNA transcript-PCR）和抑制消减杂交（suppression subtractive hybridization,SSH）技术,以8细胞紧密化胚胎cDNA作为检测子,以8细胞早期胚胎cDNA作为驱动子,研究8细胞早期胚胎及8细胞紧密化胚胎的基因表达差异。结果：共获得478个阳性克隆;进一步分析384个克隆,共获得83条ESTs（expressed sequence tags）。其中,有51个ESTs（61%）分别与36个已知基因高度同源,27个ESTs（33%）分别与7个假想基因明显同源,另有5个（6%）ESTs未发现与已知基因同源,为新的ESTs片段。紧密化过程中表达上调的基因中细胞骨架蛋白基因占4.8%,酶活性蛋白基因占9.6%,转录及翻译调节因子基因占12%,结合蛋白、蛋白间相互作用蛋白/运输蛋白基因占13.3%,核糖体结构蛋白基因占14.5%,多能性相关基因占27.7%,功能未知基因占18%;将17个与假想基因同源的ESTs和新的ESTs片段提交Gene Bank,被接受并给予了新序列编号。结论：联合SMART-PCR和SSH技术是一种研究少量标本之间基因表达差异的有效方法;在哺乳动物胚胎紧密化过程中,维持细胞多能性相关基因表达明显活跃,这可能与维持胚胎细胞在分化环境中保持其全能性相关;所获得的17个新的EST片段均可能为与紧密化密切相关的新基因的表达片段。
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