作者：胥华伟; 侯典云光呼吸集胞藻pcc6803乙醇酸脱氢酶叶绿体定位瞬时表达
摘要：为明确集胞藻PCC6803乙醇酸脱氢酶与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽（RCTP）的融合蛋白是否能准确定位到水稻叶绿体,本研究以特异引物从集胞藻PCC6803基因组DNA中扩增获得约1.5kb的片段,将该片段与水稻Rubisco小亚基叶绿体转运肽连接,然后将融合片段连入瞬时表达载体P322-d1-eGFP,测序,获得融合基因RCTP-gdh,进一步构建了叶绿体定位的瞬时表达载体RCTPGDH-eGFP-d1并进行了叶绿体定位研究.结果表明,集胞藻PCC6803 GDH共编码492个氨基酸,含有FAD结合域、FAD关联的氧化酶活性（222-464aa）以及乙醇酸氧化酶亚基（51-463aa）.激光共聚焦显微镜分析表明,融合蛋白RCTP-GDH-eGFP可以准确定位到水稻叶绿体,但其转运效率低于RCTP-eGFP的转运效率,叶绿体和细胞质中的融合蛋白RCTP-GDH-eGFP都易于聚集而呈斑点状.本研究为进-步应用集胞藻gdh基因改造C3作物光呼吸代谢途径,抑制C3作物光呼吸速率,提高作物光合速率奠定了基础.
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