作者：刘志科; 杨宁宁; 徐明国; 荆明龙; 曹旭东...鸡白痢沙门氏菌inva重组蛋白免疫胶体金试纸条临床检测
摘要：为了建立一种适合基层现场的鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)抗体检测方法,以S.pullorum的基因组为模板,利用PCR方法扩增invA基因并进行原核表达后,用Ni-NTA纯化invA融合蛋白,Western-blot和ELISA进行分析;采用30 nm的胶体金溶液标记山羊抗鸡IgY,并对金标抗体的质量浓度和pH值进行优化;在NC膜上分别包被invA融合蛋白和鸡IgY作为检测线和质控线,评估其特异性、灵敏性和稳定性.用该方法对临床的195份血清进行检测,平板凝集试验验证其准确性.结果表明:构建的invA重组蛋白质粒在大肠杆菌BL21中成功高效表达,获得的蛋白纯度较高,经Western-blot和ELISA方法证实具有良好的反应原性.该试纸条最佳胶体金标记的pH值为7.6,抗体质量浓度为1.3 mg/mL,方法的灵敏性与平板凝集试验的灵敏性一致,与其他病原菌无交叉反应.对195份临床样本进行检测,其结果与平板凝集试验的符合率为96.43%.研究建立的S.pullorum胶体金免疫层析检测试纸条具有方便、快捷、安全和灵敏度高等优势,可用于S.pullorum抗体的早期检测和流行病学筛查.
注：因版权方要求，不能公开全文，如需全文，请咨询杂志社
